1.2儀器與試劑

　　KJELTEC2300全自動(dòng)定氮儀；基爾特克消化器(瑞典福斯特卡托公司)；電子分析天平(精密度為0.0001g)等。

　　0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、10g/L硼酸溶液、400g/L氫氧化鈉溶液、lg/L溴甲酚綠溶液、1g/L甲基紅溶液、濃硫酸、催化劑(以上試劑均為分析純，均用不含氨的蒸餾水配制)。

　　2方法

　　2.1樣品消化

　　準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的樣品(稱(chēng)準(zhǔn)至0.0001g)移入消化管中，添加適量催化劑，加入12mL濃硫酸蓋上滌氣蓋。將消化管放入已預(yù)熱至420e的消化器上進(jìn)行消化，消化至全部樣品變?yōu)橥该鞯乃{(lán)綠色澄清液體，同時(shí)將抽氣泵水龍頭打開(kāi)，排除消化時(shí)產(chǎn)生的廢氣。根據(jù)樣品種類(lèi)消化時(shí)間在30~60min。消化完畢，冷卻15~20min，蒸餾測(cè)定。

　　2.2蒸餾測(cè)定原理

　　自動(dòng)定氮儀法的原理與國(guó)標(biāo)法相同，即樣品經(jīng)消化后，蛋白質(zhì)中的氮轉(zhuǎn)化為氨并與硫酸結(jié)合生成硫酸銨，然后加堿蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量，計(jì)算出氮的量，乘以換算系數(shù)6.25，即為蛋白質(zhì)含量。

　　2.3測(cè)定

　　將已消化好的樣品消化管直接放入自動(dòng)定氮儀上按儀器的要求進(jìn)行蒸餾測(cè)定，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。整個(gè)測(cè)定過(guò)程蒸餾、滴定、數(shù)字處理僅需4~5min即可完成。

　　3結(jié)果

　　3.1加標(biāo)回收試驗(yàn)

　　取6份不同種類(lèi)的食用菌樣品，在前處理消化時(shí)就分別加入硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)物，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，經(jīng)測(cè)定回收率均在99.5%~100.0%，平均回收率為99.73%，完全符合蛋白質(zhì)測(cè)定的要求。

　　3.2兩種方法的比較

　　對(duì)不同種類(lèi)、蛋白質(zhì)含量不同的食用菌樣品，分別用國(guó)標(biāo)法和自動(dòng)定氮儀法平行5次測(cè)定。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P>0.05，證明這兩種方法測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異。

　　3.3自動(dòng)定氮儀法精密度實(shí)驗(yàn)

　　取6份不同種類(lèi)的食用菌樣品，分別進(jìn)行5次平行測(cè)定。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其變異系數(shù)在0.34%~0.73%，符合國(guó)標(biāo)方法允許誤差的要求。

　　4結(jié)論

　　4.1用自動(dòng)定氮儀法測(cè)定食用菌中的蛋白質(zhì)，操作方法簡(jiǎn)單，分析速度快，安全可靠，省時(shí)省力。該方法具有很高的精密度和準(zhǔn)確性，對(duì)測(cè)定食用菌中的蛋白質(zhì)具有較強(qiáng)的實(shí)用性和可靠性，并可大批量測(cè)定，大大提高了工作效率。

　　4.2用自動(dòng)定氮儀法測(cè)定樣品中的蛋白質(zhì)，容易影響測(cè)定結(jié)果的注意事項(xiàng):?用于吸收氨的硼酸溶液的顏色應(yīng)為灰紅色，如顏色太紅，可用稀NaOH或稀HCl調(diào)節(jié)使溶液呈灰紅色為止。也可通過(guò)滴定空白來(lái)判斷，即滴定消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)要小于0.2mL，一般空白值在0.06mL左右可穩(wěn)定。?為減少滴定誤差，蒸餾前一定要除去滴定器管壁上的氣泡，排完氣泡后用蒸餾水多次沖洗吸收池；同時(shí)排盡吸收液管內(nèi)上一次測(cè)定時(shí)留下的吸收液，換上新液，然后開(kāi)始測(cè)定空白，以減少測(cè)定空白的次數(shù)，使空白值盡快穩(wěn)定。

　　【中國(guó)糧食儀器網(wǎng)】部分信息來(lái)自互聯(lián)網(wǎng)，力求安全及時(shí)、準(zhǔn)確無(wú)誤，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)對(duì)其觀點(diǎn)贊同或?qū)ζ湔鎸?shí)性負(fù)責(zé)。