概況：以留胚米Z601為原料，利用發(fā)芽過程使精米中γ一氨基丁酸積累。通過單因素實(shí)驗(yàn)、響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)得到了精米中GABA含量與浸泡溫度、浸泡時(shí)間、發(fā)芽溫度、發(fā)芽時(shí)間4 種發(fā)芽條件回歸模型，確定了對GABA含量積累最有利的發(fā)芽工藝條件為浸泡溫度31 'c、浸泡時(shí)間、發(fā)芽溫度31 'c、發(fā)芽時(shí)間27h ，此條件下精米中GABA 含量為3 1.1 3mgl10飩，是不發(fā)芽條件下的4倍。

　　目前，水稻中GABA含量的研究主要原料是糙米，糙米的口感影響人們的消費(fèi)。Z601是一種高胚率的米，其精米留肝率在80%以上。本研究以Z601 為原料，通過精米機(jī)等儀器進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)研究精米中GABA 含量與漫泡溫度、浸泡時(shí)間、發(fā)芽溫度、發(fā)芽時(shí)間4 種發(fā)芽條件的關(guān)系，為留胚精米的綜合利用和新產(chǎn)品的開發(fā)提供理論參考。

　　材料與儀器

　　材料

　　留胚米Z601  國家梗稻工程技術(shù)中心；γ- 氨基丁酸 Sigma-Aldrich CoLLC；三氯乙酸、次氯酸鈉、醋酸鈉。天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；甲醇(色i譜純)、乙睛(色譜純)  Merck KGaA Darmstadt Germany；硫基乙醇 AMRESCO Inc；鄰苯二甲醛 生工生物(上海)工程有限公司。

　　儀器

　　高效液相色譜儀LC- lO ATVP：日本島津公司 Venusil MP-C" 色譜柱(4.6mm x 250mm) ；

　　TE214S 電子天平：賽多利科學(xué)儀器有限公司；

　　LTJM-2099精米機(jī)：杭州麥哲儀器有限公司；

　　;pHS-3C型pH計(jì)：天津盛邦科學(xué)儀器技術(shù)有限公司；

　　HYG恒溫?fù)u床：上海欣蕊自動(dòng)化設(shè)備有限公司；

　　HK-02A粉碎機(jī)：廣州旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司；

　　SI-fB-3 型循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城科工貿(mào)有限公司；

　　針式過濾器：天津博納艾杰爾科技有限公司；

　　一次性使用無菌注射器( lmL)：上海治寧醫(yī)療器械有限公司。

　　實(shí)驗(yàn)方法

　　1.2.1 精米發(fā)芽工藝條件及操作要點(diǎn)工藝流程:原

　　料篩選→去皮成糙米→磨成精米→泊'毒→清洗→發(fā)芽→干燥→粉碎。

　　操作要點(diǎn):選取籽粒飽滿的稻米，去皮后用LTJM-2099精米機(jī)處理40s成為精米。為了抑制發(fā)芽后的發(fā)酵昧，用1%的次氯酸鈾水榕液洗lmin，用滅菌的去離子水反復(fù)沖洗3遍。將處理好的精米用紗布包好，恒溫浸泡，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中發(fā)芽，保持培養(yǎng)溫潤，每到上下翻動(dòng)一次。發(fā)芽結(jié)束后將培養(yǎng)且放入55CC烘箱終止活性，干燥一定時(shí)間，取出粉碎。

　　1.2.2 GABA含量測定

　　樣品準(zhǔn)備:將粉碎后的樣品過60目篩，稱取2g加入5%三氯乙酸水榕液5mL，30℃振蕩提取2h，離心(轉(zhuǎn)速10000r/min)lOmin，取上清液待測。

　　色譜條件:單泵，流速為0.9mL/min; 色譜柱為Venusil MP-C" (4.6 x 250mm) ，柱溫30 "C ;流動(dòng)相為1.6g NaAc .3H2O榕于600mL水中，pH7.2 甲醇200mL，乙氧200mL；檢測波長338nm。

　　衍生化；吸取棚酸緩沖液(O.4mol/L，pH10.4)1000μL，樣品200μL，OPA 衍生試劑(OPA 80mg，β- 琉基乙醇80μL ，乙睛10mL) 200μL ，淚合均勻，暗室中室溫反應(yīng)5min后進(jìn)樣20μL。

　　GABA標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：用配制好的250mg/L的標(biāo)準(zhǔn)液分別稀釋50、40、30、20、10、6、5倍，柱前衍生，吸取20μL進(jìn)樣，重復(fù)三次，以GABA的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。