半自動(dòng)定氮儀在食品蛋白質(zhì)含量測(cè)定的優(yōu)勢(shì)
來(lái)源： http://www.yuanweishulai.cn/ 類別：實(shí)用技術(shù) 更新時(shí)間：2014-05-26 閱讀次
凱氏定氮法是我國(guó)各類食品蛋白質(zhì)含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法，但是，在實(shí)際工作中也存在著一些不盡如人意的地方，最突出的表現(xiàn)在樣品消化處理上，消化的溫度不僅高而且時(shí)間很長(zhǎng)，這也就導(dǎo)致了整個(gè)測(cè)定分析實(shí)驗(yàn)的時(shí)間長(zhǎng)。因此能夠快速測(cè)定食品蛋白質(zhì)含量的方法，有著十分重要的意義。
我們根據(jù)工作實(shí)際及積累的工作經(jīng)驗(yàn)對(duì)這方面的問題進(jìn)行了一些探討,選用富含糖類、脂類的速溶奶粉為對(duì)象,采用三氯乙酸沉淀法分離出奶粉中的乳蛋白,然后采用甲醛固定法測(cè)定出其游離氨基含量,并通過(guò)與其凱氏定氮測(cè)出的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行比較,得出了奶粉蛋白質(zhì)含量與奶粉的游離氨基含量之間的比例關(guān)系,結(jié)果令人滿意,同時(shí)避免了樣品消化處理等繁瑣步驟,達(dá)到了快速測(cè)定的目的。現(xiàn)將具體的操作簡(jiǎn)介如下:
1.儀器與試劑:半自動(dòng)定氮儀、精密pH計(jì),電磁攪拌器、離心機(jī)、10%三氯乙酸溶液、0.06NNaOH溶液、36%甲醛溶液、0.05NHCI溶液、2%硼酸溶液、指示劑等以及樣品消化用試劑,均采用AR級(jí)試劑。
2.方法:取不同廠家、不同批號(hào)的奶粉樣4個(gè),稱取129左右溶解后定容至looml,振蕩均勻后按下述處理進(jìn)行.
2.1凱氏定氮:取sml樣品溶液加人15ml濃HZSO;、1.59KZSO一、Zml10%CuSO‘,然后在紅外爐上450oC消化處理至完全透明;冷卻后消化液定容至100ml,取20ml在蒸餾器上加堿蒸餾,餾出液用2%硼酸吸收并用0.05NHCI滴至終點(diǎn),平行一次,同時(shí)作空白試驗(yàn)。根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算奶粉中蛋白質(zhì)含量(g八009).
2.2甲醛固定法測(cè)氨基:取10ml樣品溶液加人到大離心管中,加人10ml三氯乙酸溶液后混勻,放置10min,離心smin(4000轉(zhuǎn)/分);傾去上層清液后,沉淀用50一60ml去C02水,分次將其轉(zhuǎn)移至250ml燒杯中,隨后置于電磁攪拌器上并先用0.06NNa0H調(diào)節(jié)pH至8.
2;再加人20ml甲醛溶液,imin后用o.o6NNa0H調(diào)節(jié)pH至9.2,并記錄其堿消耗體積;平行一次并作空白試驗(yàn);根據(jù)測(cè)定數(shù)據(jù)計(jì)算奶粉中氨基含量(mmol/g)。
3.半自動(dòng)定氮儀測(cè)定結(jié)果:4個(gè)樣品的測(cè)定結(jié)果，將各樣品的蛋白質(zhì)含量除以其氨基含量可以得到結(jié)果，可見,在不同的4個(gè)樣品中蛋白質(zhì)含量與氨基含量比值差異甚微,平均為1.835(S=0.0049,C,=0.27%),說(shuō)明了奶粉中蛋白質(zhì)的含量與其甲醛法測(cè)定出的氨基含量成正比,因而也表明了在實(shí)際工作中直接利用甲醛固定法測(cè)定蛋白質(zhì)含量是可行的。若直接利用1.835的常數(shù)與表2中的結(jié)果相乘則可計(jì)算出4個(gè)樣品的蛋白含量分別為(g/g):0.1879、0.2147、0.2019、0.1237，結(jié)果幾無(wú)差別。
通過(guò)半自動(dòng)定氮儀以及其它相關(guān)試劑的測(cè)定分析，我們可以總結(jié)出，在利用0.05一0.06NNa0H溶液進(jìn)行測(cè)定1.29樣品的游離氨基時(shí),即使是滴定誤差為土0.04ml,其蛋白質(zhì)含量的誤差也只有士0.0049/g,基本可以滿足一般分析的耍求,但是與凱氏定氮法相比卻省去了消化處理,而且由于利用三氯乙酸沉淀分離出乳蛋白,可以除去一些雜質(zhì)的干擾,因此不僅省時(shí)省力,且其結(jié)果更準(zhǔn)確可靠.
我們根據(jù)工作實(shí)際及積累的工作經(jīng)驗(yàn)對(duì)這方面的問題進(jìn)行了一些探討,選用富含糖類、脂類的速溶奶粉為對(duì)象,采用三氯乙酸沉淀法分離出奶粉中的乳蛋白,然后采用甲醛固定法測(cè)定出其游離氨基含量,并通過(guò)與其凱氏定氮測(cè)出的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行比較,得出了奶粉蛋白質(zhì)含量與奶粉的游離氨基含量之間的比例關(guān)系,結(jié)果令人滿意,同時(shí)避免了樣品消化處理等繁瑣步驟,達(dá)到了快速測(cè)定的目的。現(xiàn)將具體的操作簡(jiǎn)介如下:
1.儀器與試劑:半自動(dòng)定氮儀、精密pH計(jì),電磁攪拌器、離心機(jī)、10%三氯乙酸溶液、0.06NNaOH溶液、36%甲醛溶液、0.05NHCI溶液、2%硼酸溶液、指示劑等以及樣品消化用試劑,均采用AR級(jí)試劑。
2.方法:取不同廠家、不同批號(hào)的奶粉樣4個(gè),稱取129左右溶解后定容至looml,振蕩均勻后按下述處理進(jìn)行.
2.1凱氏定氮:取sml樣品溶液加人15ml濃HZSO;、1.59KZSO一、Zml10%CuSO‘,然后在紅外爐上450oC消化處理至完全透明;冷卻后消化液定容至100ml,取20ml在蒸餾器上加堿蒸餾,餾出液用2%硼酸吸收并用0.05NHCI滴至終點(diǎn),平行一次,同時(shí)作空白試驗(yàn)。根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算奶粉中蛋白質(zhì)含量(g八009).
2.2甲醛固定法測(cè)氨基:取10ml樣品溶液加人到大離心管中,加人10ml三氯乙酸溶液后混勻,放置10min,離心smin(4000轉(zhuǎn)/分);傾去上層清液后,沉淀用50一60ml去C02水,分次將其轉(zhuǎn)移至250ml燒杯中,隨后置于電磁攪拌器上并先用0.06NNa0H調(diào)節(jié)pH至8.
2;再加人20ml甲醛溶液,imin后用o.o6NNa0H調(diào)節(jié)pH至9.2,并記錄其堿消耗體積;平行一次并作空白試驗(yàn);根據(jù)測(cè)定數(shù)據(jù)計(jì)算奶粉中氨基含量(mmol/g)。
3.半自動(dòng)定氮儀測(cè)定結(jié)果:4個(gè)樣品的測(cè)定結(jié)果，將各樣品的蛋白質(zhì)含量除以其氨基含量可以得到結(jié)果，可見,在不同的4個(gè)樣品中蛋白質(zhì)含量與氨基含量比值差異甚微,平均為1.835(S=0.0049,C,=0.27%),說(shuō)明了奶粉中蛋白質(zhì)的含量與其甲醛法測(cè)定出的氨基含量成正比,因而也表明了在實(shí)際工作中直接利用甲醛固定法測(cè)定蛋白質(zhì)含量是可行的。若直接利用1.835的常數(shù)與表2中的結(jié)果相乘則可計(jì)算出4個(gè)樣品的蛋白含量分別為(g/g):0.1879、0.2147、0.2019、0.1237，結(jié)果幾無(wú)差別。
通過(guò)半自動(dòng)定氮儀以及其它相關(guān)試劑的測(cè)定分析，我們可以總結(jié)出，在利用0.05一0.06NNa0H溶液進(jìn)行測(cè)定1.29樣品的游離氨基時(shí),即使是滴定誤差為土0.04ml,其蛋白質(zhì)含量的誤差也只有士0.0049/g,基本可以滿足一般分析的耍求,但是與凱氏定氮法相比卻省去了消化處理,而且由于利用三氯乙酸沉淀分離出乳蛋白,可以除去一些雜質(zhì)的干擾,因此不僅省時(shí)省力,且其結(jié)果更準(zhǔn)確可靠.
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