飼料中粗蛋白測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法
來源： 托普云農(nóng) 類別：實(shí)用技術(shù) 更新時(shí)間：2017-09-29 閱讀次
飼料分析是飼料生產(chǎn)中其原料和品質(zhì)鑒定的重要依據(jù)，也是評(píng)價(jià)飼料質(zhì)量好壞的標(biāo)準(zhǔn)。就比如飼料中粗蛋白含量將直接決定飼料的營養(yǎng)價(jià)值，因此，飼料分析過程少不了粗蛋白的檢測(cè)，不僅如此，還需要掌握飼料粗蛋白測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法，用到的實(shí)驗(yàn)設(shè)備是粗蛋白測(cè)定儀，樣品制備及操作方法如下：
選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200克，粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，以高氯酸-硫酸消化法為A組，用25毫升錐形瓶稱量3組平行樣品。同時(shí)設(shè)置2組空白組，以蔗糖作為空白。準(zhǔn)確稱量樣品0.5克，精確到0.1毫克。具體質(zhì)量為，A1組0.5008克，A2組0.5002克，A3組0.5006克，空白A1組0.5001克，空白A2組0.5003克。以混合催化劑法為B組，用50毫升凱氏瓶稱量3組平行樣品。同時(shí)設(shè)置2組空白，以蔗糖作為空白。準(zhǔn)確稱量樣品0.5克，精確到0.1毫克。具體質(zhì)量為，B1組0.5007，B2組0.5005克，B3組0.5002克，空白B1組0.5007克，空白B2組0.5004克。向A組樣品中分別滴加5滴蒸餾水潤濕，再添加6毫升濃度為98%的濃硫酸，加入6滴60%高氯酸，以電阻絲消煮2分鐘，冷卻后再加入4滴60%高氯酸，反復(fù)消煮5次，后3次高氯酸加入量依次為3滴、2滴、1滴。溶液顏色逐漸變淺，直至無色透明。定容至100毫升。向B組樣品中分別加入混合指示劑6.4克（0.4克五水硫酸銅，6克硫酸鉀），與試樣混合均勻，再加入12毫升濃度為98%的濃硫酸和2粒玻璃珠，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強(qiáng)火力（360~410℃）直至呈透明的藍(lán)綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少2小時(shí)。冷卻后定容至100毫升。
將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20毫升硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶?jī)?nèi)。蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補(bǔ)加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10毫升注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10毫升濃度為40%的氫氧化鈉水溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4分鐘降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1分鐘，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶?jī)?nèi)，然后停止蒸餾。對(duì)兩組樣品及空白分別重復(fù)此操作。
蒸餾步驟的檢驗(yàn)。精確稱取0.2克硫酸銨，代替試樣，按蒸餾步驟進(jìn)行操作，測(cè)得硫酸銨含氮量為21.19±0.2%，否則應(yīng)檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。蒸餾后的吸收液立即用0.01摩爾/升鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。最后通過公式（蛋白質(zhì)（%）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V′/V）×100）計(jì)算即可。
選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200克，粉碎后全部通過40目篩，裝于密封容器中，以高氯酸-硫酸消化法為A組，用25毫升錐形瓶稱量3組平行樣品。同時(shí)設(shè)置2組空白組，以蔗糖作為空白。準(zhǔn)確稱量樣品0.5克，精確到0.1毫克。具體質(zhì)量為，A1組0.5008克，A2組0.5002克，A3組0.5006克，空白A1組0.5001克，空白A2組0.5003克。以混合催化劑法為B組，用50毫升凱氏瓶稱量3組平行樣品。同時(shí)設(shè)置2組空白，以蔗糖作為空白。準(zhǔn)確稱量樣品0.5克，精確到0.1毫克。具體質(zhì)量為，B1組0.5007，B2組0.5005克，B3組0.5002克，空白B1組0.5007克，空白B2組0.5004克。向A組樣品中分別滴加5滴蒸餾水潤濕，再添加6毫升濃度為98%的濃硫酸，加入6滴60%高氯酸，以電阻絲消煮2分鐘，冷卻后再加入4滴60%高氯酸，反復(fù)消煮5次，后3次高氯酸加入量依次為3滴、2滴、1滴。溶液顏色逐漸變淺，直至無色透明。定容至100毫升。向B組樣品中分別加入混合指示劑6.4克（0.4克五水硫酸銅，6克硫酸鉀），與試樣混合均勻，再加入12毫升濃度為98%的濃硫酸和2粒玻璃珠，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強(qiáng)火力（360~410℃）直至呈透明的藍(lán)綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少2小時(shí)。冷卻后定容至100毫升。
將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20毫升硼酸吸收液和2滴混合指示劑的錐形瓶?jī)?nèi)。蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色，否則需補(bǔ)加硫酸。準(zhǔn)確移取試樣分解液10毫升注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10毫升濃度為40%的氫氧化鈉水溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4分鐘降下錐形瓶使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1分鐘，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶?jī)?nèi)，然后停止蒸餾。對(duì)兩組樣品及空白分別重復(fù)此操作。
蒸餾步驟的檢驗(yàn)。精確稱取0.2克硫酸銨，代替試樣，按蒸餾步驟進(jìn)行操作，測(cè)得硫酸銨含氮量為21.19±0.2%，否則應(yīng)檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。蒸餾后的吸收液立即用0.01摩爾/升鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變成灰紅色為終點(diǎn)。最后通過公式（蛋白質(zhì)（%）=（V2-V1）·c×0.0140×6.25/（m×V′/V）×100）計(jì)算即可。
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